高效液相色谱-质谱联用法测定水果蔬菜中的多菌灵残留量方法的研究

塞　堑　Ｃ川ＮＥＳＥ　ＣｏＭＭ“ＮＩＴｖ　ＤｏＣＴｏＲＳ　高效液相色谱一质谱联用法测定水果蔬菜中的多菌灵残留量方法的研究　史明　２６６００２青岛市市南区疾病预防控制中心　关键词高效液相色谱质谱多菌灵　农药残留０１．００１　水果蔬菜　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７—６１４ｘ．２００９　１５０ｍｌ圆底烧瓶中，在４０℃水浴上浓缩，　基本除去甲醇。将浓缩液转移至１２５ｍ１　分液漏斗中，加入１０ｍｌ　０．１ｍｏｌｆＬ盐酸和　５０ｍｌ　１０％ＮａＣ１溶液，混合均匀，再加入　２５ｍｌ石油醚剧烈振荡。静置分层后，弃　去石油醚，水相用２ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ溶液调　节ｐＨ至６．５—８．５，用二氯甲烷萃取３　次，每次２０ｍｌ。合并二氯甲烷，以无水硫　明显。与ＤＡＤ检测器相比，质谱检测器　采用ＳＩＭ模式后，检测灵敏度显著提高，　目标物在紫外光下无响应，但在质谱中有　很强的响应。同时质谱抗干扰强，检出限　低，定量结果更趋准确和真实，方法耐用　性更强；用扫描模式在ｍ／ｚ　１２０～２２０范　围扫描。质谱中的准分子离子ｍ／ｚ１９２　［Ｍ＋Ｈ］　为基峰，ｍ／ｚｌ６为［Ｍ—　ＣＨ３０］　，ｍ／ｚ　２１４为［Ｍ＋Ｎａ］　。因此，　实验选取ｍ／ｚ１９２和ｍ／ｚｌ６０作为监测离　子对进行定性，将ｍ／ｚ１９２用于多菌灵的　定量测定。　多菌灵（Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ）又称苯骈咪唑　４４号，化学名称为２一（甲氧基氨基甲　酰）苯骈咪唑，是一种广谱、高效、内吸性　杀真菌农药，对菌核病、炭疽病、枯萎病　等都有防治效果，已广泛应用于水果蔬菜　生产。由于其化学性质稳定，能够持久　地残留在果品蔬菜中，导致多菌灵残留累　积，可通过食物链影响人体健康。研究表　明，多菌灵能引起肝病，还能导致染色　体畸变等病症”　。目前测定多菌灵的分　析方法主要有液相色谱法　’　、分光光度　法　。高效液相色谱法常用紫外检测　器，由于其选择性差，灵敏度受到，不　同的样品必须采用不同的色谱条件，对检　测干扰极大，方法的通用性和耐用性不　强。为此，本实验采用高选择性、高灵敏　度的质谱检测器，以常见水果蔬菜为研究　对象，建立了检测多菌灵残留的液相色谱　质谱联用方法。　酸钠干燥，将滤液转移至１５０ｍｌ圆底烧瓶　中，在４（】℃水浴中减压蒸发至干，最后用　甲醇溶解定容至１．０ｍｌ。　高效液相色谱一质谱条件：色谱柱，　Ｄｉｋｍａ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８　ｆ　４．６ｍｍ　ｉ．ｄ．×　２５０ｍｍ，５ｐ，ｍ）；流动相，４％四氢呋喃水溶　液（Ａ）：甲醇（Ｂ）＝７：３；流速，０．６ｍｌ／分；　柱温，３＆Ｃ；检测波长，２８２ｎｍ；进样量，　１０１，ｚｌ。　标准曲线及方法检出限：将标准储备　液用甲醇稀释成浓度分别为０．０２、０．０４、　０．１０　０．２０、０．４０、０．８０、１．Ｏ０、２．Ｏ０　３．Ｏ０　质谱检测选择正离子选择离子检测　（ＳＩＭ）模式，以ｍ／ｚ１９２和ｍｆｚｌ６０为定性　检测离子对，ｍ／ｚ１９２为定量检测离子，干　燥气为氮气，流速１０Ｌ／分，干燥气温度　３５０℃，毛细管电压３５００Ｖ，裂解电压　１００Ｖ。　和４．ＯＯｍｇ／Ｌ的标准溶液。在相同的色　谱及质谱条件下，测定多菌灵的峰面积。　以峰面积对进样浓度作图，绘制标准校正　曲线。在含量为０．０２～４．ＯＯｍｇ／Ｌ范围内　得出标准曲线，线性回归方程为Ｙ＝　５．０２８×１０７Ｘ＋２．３２４×１０５，相关系数ｒ＝　结果与讨论　实验部分　主要仪器与试剂：１１００型高效液相　色谱一质谱联用仪（Ａｇｉｌｅｎｔ科技有限公　司），配在线脱气机、四元低压泵、自动进　样器、柱温箱、二极管阵列检测器、电喷雾　四级杆质谱检测器，仪器控制和数据采集　分析使用ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ工作站；超纯水系　统（历元电子仪器公司），ＫＳ一３００Ｄ系列　超声波清洗器，３００Ｗ（科生仪器厂）。　Ｒ２２００型旋转蒸发仪（Ｂｕｃｈｉ公司）；甲醇　（分析纯），四氢呋喃、甲醇（色谱纯，Ｍｅｒ—　ｃｋ公司）；ＮａＣ１、ＮａＯＨ、石油醚（沸程３Ｏ　６０℃）、二氯甲烷（分析纯）；无水硫酸　钠：使用前在５００ｏＣ马弗炉中灼烧４小　时；ＨＣＩ（分析纯）；多菌灵标准品（Ｄｒ．Ｅｈ—　～样品前处理条件的选择：多菌灵是一　种两性化合物，在中性和偏碱性水溶液中　溶解度低，微溶于丙酮、乙酸乙酯和氯仿　等有机溶剂。实验比较了在酸性条件下，　甲醇和水提取多菌灵的效果。取空白蔬　菜，加入多菌灵标准溶液，然后分别用水　和甲醇提取，同前述方法净化。结果甲醇　盐酸法回收率高，而水提法回收率不到　５０％，故选择醇提法。在甲醇中加入酸液　使多菌灵成盐，用石油醚除去脂溶性物　质。再加入ＮａＯＨ溶液，调整ｐＨ至６．５　８．５，使多菌灵转成原形，再用有机溶剂　萃取，从而达到纯化、富集多菌灵的目的。　流动相的选择：实验中发现以甲醇一　水为流动相洗脱时，多菌灵峰型宽而且拖　尾。经过反复实验，选择了四氢呋喃作为　调节剂，使峰型得到改善；采用４％四氢　呋喃水溶液（Ａ）：甲醇（Ｂ）＝７：３。　质谱方法的优化：实验发现，用ＤＡＤ　检测器在紫外波长２８２ｎｍ下进行检测，　多菌灵信号被掩盖，无法准确定量。而用　灵敏度和选择性更高的质谱检测器在选　择离子监测模式下进行检测，多菌灵响应　０．９９９４。取空白样品提取液，加入一定量　的多菌灵标准品，以信噪比的３倍来确定　方法的检出限为０．１２ｍｇ／Ｌ（ＲＳＤ＜５％）。　实际样品的测定结果：测定结果见表　１，多菌灵的平均加样回收率为９５．５％～　１０３．２％；最大相对标准偏差为４．３％。　测定结果令人满意。不同产品中多菌灵　的最高残留限量为０．５ｍｇ／ｋｇ，本方法的　灵敏度完全能够达到分析要求。采用三　波长分光光度法测定水果蔬菜中多菌灵　的残留量，方法简单，测定结果准确，方法　重现性好。　参考文献　１　张建新，杜双奎，杨小姣．陕西省主要蔬菜　产区多菌灵农药残留分析与评价．安全与　环境学报，２００５，５（６）：７８—８０．　～２李桂风，郝征红，董淑敏，等．花生中多菌灵　残留量的高效液相色谱分析方法的研究．　分析测试学报，１９９８，１７（３）：６９—７０．　３　Ｂｅｍａｌ　Ｊ．Ｌ．，ｄｅｌ　Ｎｏｚａｌ　Ｍ．Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ—ｐｅｒ－　ｆｏｍｍｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｎｏｍｙｌ　ａｎｄ　ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ　ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｉｎ　ａｐｉａｒ—　ｉａｎ　ｓａｍｐｌｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ａ，　１９９７，７８７：１２９—１３６．　ｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公司）。　标准溶液配制：准确称取标准品，用　甲醇溶解配成浓度为ｌＯＯｍｇ／Ｌ的标准储　备液。使用时用甲醇逐级稀释成浓度为　０．０２０～２．Ｏｍｇ／Ｌ的标准溶液。　样品预处理：准确称取粉碎｝昆匀后的　样品２５．Ｏｇ于１００ｍｌ具塞三角烧瓶中，加　入５０ｍｌ甲醇和１０ｍｌ　０．１ｍｏｌ／Ｌ　ＨＣ１，搅拌　均匀，超声振荡提取２小时，用布氏漏斗　抽滤，以少量甲醇清洗残渣，合并滤液于　４默涛，陈鹤鑫，陆贻通，等编著．农药残留量　分析方法．上海：上海科学技术出版社，　１９９２：２０１—２０３．　中国社区医师・医学专业半月刊２００９年第１期（第１１卷总第２０２期）３