(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号(10)申请公布号 CN 104988203 A (43)申请公布日(43)申请公布日 2015.10.21
(21)申请号 201510294331.5(22)申请日 2015.06.02
(71)申请人北京福德安科技有限公司
地址100083 北京市海淀区天秀路10号中
国农大国际创业园1号楼B607室申请人中国农业大学(72)发明人许文涛 黄昆仑 何景 翟百强
徐瑗聪 董凯(51)Int.Cl.
C12Q 1/06(2006.01)
权利要求书1页 说明书3页 附图2页
(54)发明名称
一种微生物快速检测测试片的制作(57)摘要
本发明公开一种微生物快速检测测试片的制作方法，涉及微生物快速检测技术领域。本发明通过以下技术方案实现。菌落凝胶采用吸液量大和吸液量快、易形成网络结构的混合冷水可溶性凝胶，吸液材料选用吸液和分散快的无纺布，有效解决吸液速度慢和容易测流的问题；混合凝胶比例为吸液量大凝胶/吸液量快且易形成网络结构凝胶：1:2—1:10。采用预凝胶方式形成凝胶；2×—4×的培养基分点均匀滴加2—5mL，培养基区至少为7cm×7cm，保证了微生物生长所需营养，且培养基分布均匀，易于形成规则菌落，避免菌落拖尾；标签采用可写字的防水彩色胶带，用于区别不同检测片，操作者可在彩色胶带上写实验记录(样品号、检测时间和编号等)，易于操作(产品结构见附图)。 C N 1 0 4 9 8 8 2 0 3 A CN 104988203 A
权 利 要 求 书
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1.一种微生物快速检测测试片的制作，包括以下步骤：
(1)微生物快速检测测试片的制作所需材料：底板、双面胶、无纺布、透明薄膜、标签、冷水可溶性凝胶、培养基；
(2)冷水可溶性凝胶均匀黏于双面胶的一面；
(3)在黏有冷水可溶性凝胶的另一面覆盖一层无纺布；
(4)将黏有冷水可溶性凝胶的双面胶贴于检测底片的正；(5)在无纺布上方滴加培养基，晾干；(6)上面覆盖一层透明薄膜，一边用标签固定于底片上；(7)包装，灭菌。
2.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：底板材料为铜版纸或合成材料，大小不小于9cm×9cm，一面印有公司标，另一面的正中间印有不小于7cm×7cm大小的方格。
3.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测试纸片的制作，其特征在于：培养基区域的大小不小于7cm×7cm.。
4.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：透明薄膜的材料为菲林片，上方印有1cm×1cm的方格线。
5.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：标签的颜色为单色，不同的颜色代表不同的微生物试纸片。
6.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：冷水可溶性凝胶的组成为吸液量大的冷水可溶性凝胶和吸液量快且易形成凝胶网络结构的冷水可溶性凝胶。
7.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：冷水可溶性凝胶的组成中吸液量大的冷水可溶性凝胶：吸液量快且易形成凝胶网络结构的冷水可溶性凝胶的比例为1:2-1:10，其中吸液量大的冷水可溶性凝胶中的凝胶比例任意，吸液量快且易形成凝胶网络结构的冷水可溶性凝胶中的凝胶比例任意。
8.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：吸液量大的冷水可溶性凝胶为乙基纤维素钠、甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠等凝胶，吸液量快且易形成凝胶网络结构的冷水可溶性凝胶为黄原胶、瓜尔胶、刺槐豆胶等凝胶。
9.根据权利要求1所述的一种微生物快速检测测试片的制作，其特征在于：无纺布上方滴加的培养基浓度为2×—4×，用量为2mL—5mL。
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说 明 书
一种微生物快速检测测试片的制作
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技术领域
本发明涉及一种微生物快速检测试纸片的制作，所属技术领域是微生物学检测。[0002] 背景[0003] 目前，我国微生物的检验采用传统检测技术，即平板法、MPN法和生化鉴定法。操作步骤有配置培养基、清洗培养器皿、灭菌、增菌、生化鉴定等，对实验室环境、设备要求高，所需空间大。传统检测技术难以满足现场即时检测鉴定微生物的需求，难以实现对微生物的实时监控，延后了污染品的处理时间，污染暴露人群难以得到有效控制，所以微生物快速检测试纸片正是市场亟需的技术产品。[0004] 目前，此类微生物检测的产品涉及的专利有美国3M公司的“USRFACE COLONY COUNTING DEVICE AND METHOD OF USE(US005681712A)”、广东省微生物研究所的“一种快速检测微生物的测试片及其制备方法和应用(ZL200910009717.3)”和“冷水可凝的培养基固定剂及其制备方法(ZL200910039835.7)”、卢新的“食品中病原微生物的测试片(ZL200520120355.0)”、广州绿洲生化科技有限公司的“利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法(ZL2007100284.3)”和广州天河绿洲生物化学研究中心的“霉菌和酵母菌的快速检验纸片(ZL03274715.2)”。
[0005] 美国3M公司的Petrifilm微生物试纸片系列产品吸液速率低，容易造成样品的侧流，国内此类产品有广州绿洲生化科技有限公司的微生物快速检测试纸片系列产品，该系列产品一致性差，容易产生假阴性结果，准确度低。此发明技术产品克服了以上产品缺点。
[0001]
发明内容
本发明提供了一种易于操作、检测效果优、准确率高的微生物快速检测测试片，解决了目前市场上已有微生物快速检测技术产品所存在的问题。[0007] 本发明提供的微生物快速检测测试片可检测菌落总数、大肠菌群、大肠杆菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌、霉菌和酵母菌等微生物。[0008] 本发明还提供了上述所述微生物快速检测测试片的技术方案，具体如下：[0009] 本发明采用吸液量大的冷水可溶性凝胶(如甲基纤维素钠、乙基纤维素钠和聚丙烯酸钠、)和吸液量快且容易形成凝胶网络结构的冷水可溶性凝胶(如刺槐豆胶、黄原胶和瓜尔胶等)的混合物作为形成菌落所需的凝胶支撑，选用吸液和分散快的无纺布作为吸液材料，这样有效解决了吸液速度慢和容易测流的问题。微生物生长形成肉眼可见的菌落所需条件为凝胶结构良好、营养充分、培养环境合适等，本发明采用的冷水可凝凝胶为吸液量大的冷水可溶性 凝胶和吸液量快且容易形成网络结构的冷水可溶性凝胶的比例为1:2—1:10的混合物，且采用预形成凝胶的方式，即液体培养基滴加于冷水可溶性凝胶形成凝胶，再晾干的方式，此种方式形成的凝胶结构好，液体培养基为2×—4×的培养基分点均匀的滴加2—5mL，培养基区至少为7cm×7cm。此发明保证了微生物生长所需营养，且培养基分布均匀，易于形成规则菌落，避免菌落拖尾。本发明的标签采用可写字的防水彩色胶带，此发明易于区别不同的微生物试纸片，操作者可在彩色胶带上方做实验记录，如样品号、检测
[0006]
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时间、检测编号等数据，此发明易于实验者操作。
[0010] 本发明还提供上述所述微生物快速检测测试片的使用方法，具体如下：[0011] (1)将试纸片平放于超净工作台的台面上，用灭菌移液器吸取样品原液或稀释液1mL，揭起盖膜，滴加于无纺布上，缓慢盖上盖膜。[0012] (2)将不多于12片试纸片装于一自封袋，平放于合适温度的培养箱。[0013] (3)培养规定时间后，根据菌落颜色判定菌落数。[0014] 本发明的微生物快速检测测试片，可替代传统检测技术，大大提高了微生物检测效率。
[0015] 本发明的微生物快速检测测试片随用随取，所需空间少，节省了实验人员配置培养基、清洗玻璃器皿、废液处理等操作，加大标签的可书写面积，更便于实验人员操作。[0016] 本发明的微生物快速检测测试片采用的凝胶、培养基、标签制备方法使微生物快速检测更准确、操作更简单、检测效果更优，产品一致性更好。附图说明
图1一种微生物快速检测测试片的产品图。
[0018] 图2微生物快速检测测试片的双面印刷的底板图。[0019] 图3微生物快速检测测试片的培养基区立体图。[0020] 图4微生物快速检测测试片的透明薄膜印刷图。
[0017]
具体实施方式
[0021] 下面结合实施例对本发明作进一步的描述。[0022] 实施例1：菌落总数快速测试片的制作方法[0023] 称取甲基纤维素钠2g，黄原胶10g，混合均匀，均匀黏于双面胶的一面，上面覆盖一层无纺布，切割成7cm×7cm的方块，贴于已印好公司标和方形的底片(9cm×9cm)正中间。配4×菌落总数培养基分数点均匀滴加与无纺布上方，平方晾干。用可写字的防水彩色胶带(1.5cm宽)将菲林片(9cm×9cm)固定于底板的一边，菲林片固定边的对边多出底板边的0.5cm。将做好的快速测试片装于自封袋中，先不封口，采用50℃气体灭菌5h。封 好口后置于冰箱保存。[0024] 实施例2：菌落总数快速测试片的测试
[0025] 取几种菌株稀释液接种到菌落总数快速测试片上，接种量为1mL，37℃培养15h，所有菌株都呈现红色菌落。[0026] 实施例3：大肠杆菌快速测试片的制作方法[0027] 称取乙基纤维素钠2g，瓜尔胶5g，黄原胶5g，刺槐豆胶5g，混合均匀，均匀黏于双面胶的一面，上面覆盖一层无纺布，切割成8cm×8cm的方块，贴于已印好公司标和方形的底片(10cm×10cm)正中间。配2×大肠杆菌培养基分数点均匀滴加与无纺布上方，平方晾干。用可写字的防水彩色胶带(1.5cm宽)将菲林片(10cm×10cm)固定于底板的一边，菲林片固定边的对边多出底板边的0.5cm。将做好的快速测试片装于自封袋中，先不封口，采用50℃气体灭菌5h。封好口后置于冰箱保存。[0028] 实施例4：大肠杆菌快速测试片的测试
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取几种菌株稀释液接种到菌落总数快速测试片上，接种量为1mL，37℃培养15h，大肠杆菌都呈现蓝至紫色菌落，其他菌落为无色或粉红色。
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说 明 书 附 图
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说 明 书 附 图
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